包括制板、点样、展开、显色、检测等。

（一）   制板

方法：涂布法、倾注法、浸润法、喷涂法。

这里介绍倾注法：

1、清板：载板是表面平滑的玻璃板，矩形，规格根据需要定，常见有：5×15；5×20；8×20；10×20；20×20等。同玻璃仪器洗涤方法洗净、晾干或烘干、用乙醇擦净。

2、调浆：称一定量吸附剂于研钵中（0、3mm薄层100平方厘米需硅胶G1克三氧化二铝1、2克），加2倍量水（先加部分，迅速研磨，再倒入全部水），研磨至浆液刚粘稠时进行涂布。

注意：掌握加水量；研磨动作适中，防止产生气泡；掌握浆液的涂布“火候”。

3、涂布：将浆液沿玻棒倒于板的一端，并将这端提起，用玻棒带动吸附剂涂遍整板迅速震拍使厚薄均匀，平放、晾干（10-15分钟）。

这一步是关键，要求涂布好的薄层，厚薄均匀、表面平滑、没有气泡波纹、牢固不易脱落。

4、活化：风干后的薄层板直接放于烘箱中烘干或放在干燥铝架上烘干。烘干温度与时间视需要定，一般硅胶板在105℃下烘1小时，三氧化二铝板在200-220℃下烘4小时。活化后的薄层板储存在干燥器内一周后应另行活化。

 
（二）   点样

这是关键的操作，只有原点足够小，形状规则，才有可能得到较高的分离度和灵敏度。

要求：点样精确、迅速（不超过10分钟）；斑点集中（溶剂扩散直径不超过3mm）；各点大小一致，在同一起始线上。

工具：微量注射器或定体积毛细管。

操作：刀片刮去薄层板边缘的吸附剂；作出起始线和溶剂前沿记号（起始线距底端2-3厘米，前沿视展距而定）；用注射器点样，点与点间距1、0-1、5厘米，点与边缘距离0、5厘米。

注意：板不得点破；点样体积少于2微升；点样量几至几十微克；边点边用洗耳球吹风以去溶剂；点样时间长时要在干燥盒内点样。

 
（三）   展开

方法：上行法、下行法、园形离心法、园形向心法、程序多级展开法等，最多的是上行法。

装置：展开 （立式、卧式）（内衬滤纸，以使溶剂挥发）。

方法：

1、内加适量展开剂，加盖密闭10分钟，使内溶剂蒸汽饱和。

2、将薄层板点有样品液的一端浸入展开剂中（5-7mm）。盖好盖子（注意展开剂不得浸没样点、浸没部分要与起始线平齐）。

3、展开到达溶剂前沿时取出薄层板挥干溶剂。

注意：展开剂用过1-2次后要更换，因底剂与洗脱剂的比例已改变；展开过程中槽内要保证溶剂蒸气饱和，以防边缘效应。

（四）   显色

1、显色剂显色法：喷雾显色，借助喷雾器喷细雾至板面湿润。

2、紫外线照射法：如AFTB1在WL365nm观察；有机氯在254nm下显色。

3、对本身是有色的斑点则不需显色。

（五）   定性定量

1、定性：斑点显色后量出高度，求得Rf值，通过查阅文献鉴别各种物质。

但Rf可受到外界因素的影响而使不易重现，这些外界因素有：

吸附剂的种类及粗细度、粘合剂的性质及含量、薄层厚度、展开系统组成、展开槽内蒸汽的饱和程度、展距、薄层板活性及点样量大小等。

所以通常的定性方法是将样液和标液点到同薄层上作对照。为了增加鉴定可靠性，可进行确证或更换展开系统。

2、定量：

传统的方法是目视半定量法，此法简便易行，无需贵重仪器，易于推广。

（1）最低检出量法，用不同浓度的标准溶液点板、展开、显观察、反复核定在该实验条件下标准物质的最低检出量是多少。

最低检出量（ug）=最低检出量时的体积（ul）*标准溶液浓度（ug/ul）

将不同量的样液与最低检出量时的标液点板，薄层色谱分离，经显色后观察。如果各标准点相同位置上样液的斑点大小、颜色深浅相同，就可以认为滴加的样液中含有最低检出量待测物；如果比最低检出量点颜色深，则需稀释，直到相同。

（2）目视直接比较法：在同一薄层板上点不同体积的样液和各种浓度的标液，展开、显色后，用肉眼观察比较与标准的面积大小和颜色深浅，台两者近似，即可以认为此样品液体积中含待测物量与标准点中所含物质的量相同。

近十年，原位直接定量有了新的发展，薄层扫描仪和棒状薄层色谱氢焰扫描仪的出现，使极微量的物质（PPb-PPm级）在分离后可直接在薄层上得到精确的定量，从而使该法从过去的半定量成为现代化全新定量。

薄层扫描仪简介：

它是可以对斑点进行扫描的专用分光光度计，用可见光或紫外光作光源，线性扫描或锯齿扫描薄层板展开后的斑点，该斑点就吸收该组分特征波长的单色光，剩余的单色光经透射或反射或发射荧光，由检测器积分起来，获得这块斑点面积的待测物质含量。有透射法；反射法；萤光测定法。

 
棒状薄层色谱氢焰扫描仪简介：

用表面涂有吸附剂的石英棒（直径0、9mm；长200mm）代替薄层板，点样于棒一端，按一般方法展开，以氢焰检测器为检测单元，棒放于仪器内，点火，以一定速度扫描。

斑点洗脱后测定法：

薄层经展开后用刮刀或捕集器将斑点的吸附剂捕集后，再用适当有机溶剂洗脱，然后用可见、紫外分光光度法、荧光分光光度法测定含量。

但样品斑点不能喷显色剂，以免影响不测定，斑点位置的确定方法。

样品在紫外线下发射荧光的，可在紫外灯下观察斑点并用针划去斑点位置。

用碘蒸汽显色，在组分处理出棕色斑点（碘吸附后会挥发）。

用标准物对照，将标准点于边上一测显色时，盖住样品，定出斑点位置。

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