（2）络合薄层
硝酸银薄层的制法，可在吸附剂中加入5~25%硝酸银水溶液代替水制成均匀糊状，再按常法铺成薄层，制成薄层避光阴干，于105℃活化半小时后避光贮存。制成的薄层以不变成灰色为好，在三天内应用。也可先把硝酸银用少量水溶解，再用甲醇稀释成10%溶液，把预先制好的硅胶G薄层浸入此溶液中约1分钟，取出避光阴干，按上法活化，贮存。
（二）吸附剂的活度测定
1. 氧化铝活度的测定
一般可用4~5种偶氮染料以薄层层析法进行测定。
染料试剂的配制：取偶氮苯（Azobenzene）50mg，对甲氧基偶氮苯（P-Methoxyuzobenzene）,苏丹黄（Sudan I, Benzeneazo-β-naphthol），苏丹红（Sudan Ⅲ Tetrazobenzol-β-naphthol），对氨基偶氮苯（P-Aminoazobenzene）各20mg，分别溶于50ml重蒸馏的四氯化碳（经氢氧化钠干燥）中。
常法制备不含粘合剂氧化铝薄层，以铅笔尖或毛细管尖在薄层板一端2~3 cm处间隔1cm左右轻轻点上5个可以看清的小点。各吸取约0.02 ml染料试剂分别点于原点上(使用点样仪器)，以四氯化碳为展开剂，展开时薄层板与容器底部交角为10~40° 之间，展开后测出各斑点的Rf值，从表1确定氧化铝的活度（一般高活性氧化铝Ⅰ~Ⅲ级活度使用本法时，结果往往偏低）。
另取不含粘合剂氧化铝薄层板一块，置于水蒸汽饱和容器内，2~3小时后取出，按上述方法测定活度。观察有无变化。
2．硅胶活度的测定
一般选用三种染料的薄层层析法进行测定。
欧洲药典1969年记载用0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow. P-Dimethylaminoazobenzene）、苏丹红（Sudan Ⅲ）、靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline）的苯溶液各10 μl点滴于硅胶G或硅胶H薄层上(使用点样仪器)，以苯为展开剂，展开10 cm（约20分钟），三种染料应明显分离。靛酚蓝斑点接近于起始线，二甲基黄斑点在薄层的当中，苏丹红斑点在两斑点之间，则认为薄层板活性符合要求。
国内出售薄层层析用的硅胶在吸附剂名称之后加几个字标明的意思是：硅胶G（G是Gypsum石膏的缩写，表示加了石膏），硅胶H（H表示不加石膏），硅胶GF254（F254表示加石膏和在波长254 nm处显绿色荧光的硅酸锌锰），硅胶GF365（表示加石膏和在波长365 nm处显黄色荧光的硫化锌镉）。氧化铝则类推。
表1氧化铝活度与偶氮染料比移值关系
偶氮染料 |
氧化铝活度级Rf值 |
二级 |
三级 |
四级 |
五级 |
偶氮苯 |
0.59 |
0.72 |
0.85 |
0.95 |
对甲氧基偶氮苯 |
0.16 |
0.45 |
0.69 |
0.89 |
苏丹黄 |
0.02 |
0.25 |
0.87 |
0.98 |
苏丹红 |
0.00 |
0.10 |
0.35 |
0.50 |
对氨基偶氮苯 |
0.00 |
0.05 |
0.08 |
0.19 |
（三）薄层层析的应用
薄层层析法在中草药化学成分的研究中，主要应用于化学成分的预试、化学成分的鉴定及探索柱层分离的条件。用薄层层析进行中草药化学成分检识，可依据各类成分性质及熟知的条件有针对性地进行。由于在薄层上展开后，可将一些杂质分离，选择性高，可使预试结果更为可靠，不仅可通过显色获知成分类型，而且可初步了解主要成分的数目及其极性大小。
例一：湖北贝母生物碱成分的TLC检识
吸附剂：硅胶CMC- Na薄层
样品：湖北贝母总生物碱氯仿溶液
展开剂：C6H6-EtOAc-NHEt2（6：4：1）
显色剂：改良碘化铋钾喷雾
例二：丹参色素的TLC检识
吸附剂：硅胶G-CMC-Na板
样品：丹参乙醚提取液
展开剂：石油醚-乙酸乙酯（9：1）
记录TLC结果
五、问题与讨论
1. 硅胶、氧化铝、聚酰胺各适合于分离哪些类型的化合物？
2. 什么是制备薄层？简要写出其操作过程。
3. 什么是边缘效应？怎样产生的？如何克服？
参阅”天然药物化学实验”
